第八章 高效液相色谱法及临界流体色谱法基本要求:1. 了解高效液相色谱法的优点及适用范围 2. 理解常用检测器的原理优缺点及适用范围 3. 理解各种分离方式的原理及适用的分析对象及选择原则 4. 理解超临界流体色谱法的原理优缺点及适用范围高效液相色谱法是一种以液体为流动相的现代柱色谱分离分析方法它是在经典液相色谱的基础上引入气相色谱的理论和技
第十八章高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography, HPLC)钟国平2016-01-13中山大学临床研究中心中山大学临床药理研究所中山大学药学院药物代谢与药动学实验室一、概述二、HPLC系统组成三、HPLC的类型四、HPLC的应用五、HPLC的发展一、高效液相色谱法概述HPLC是色谱法的一个重要分支,以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极
高效液相色谱法 附录Ⅵ D. 高效液相色谱法 高效液相色谱法是用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱经进样阀注入供试品由流动相带入柱内在柱内各成分被分离后依次进入检测器色谱信号由记录仪或积分仪记录 1.对仪器的一般要求
第八章 高效液相色谱( HPLC)1在已知化合物中能直接进行气相色谱分析的化合物约占15%,加上衍生化的化合物,也不过20%左右。高沸点、难挥发、热不稳定、离子型化合物、高聚物乃至生物大分子,很难用气相色谱法分析。在经典的液体柱色谱法基础上,采用高压泵、高效固定相和高灵敏度检测器,引入气相色谱理论后发展起来的柱色谱技术称为高效液相色谱法。特点:应用范围广,分离效率高,分析速度快,灵敏度高,操作自动
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检测器低可以敏感A2S1 S2 由于2-甲基丁基-14-二醇不仅缺乏必要的吸收基团而且不能在OB柱拆分应采用苯甲酰氯将其衍生为2-甲基丁基-14-二醇二苯甲酸酯后才能进行分离测定 蒸发光散射质量检测器(Evaporative Light-Scatting Mass Detector ELSD)蒸发流动相S 在硅胶吸附色谱中 对相对保留值和分离选择性起主导作用的是溶质与固定相的作用 流动
高效液相色谱法的主要类型与原理(一)正相键合相色谱法 固定相的极性大于流动相的极性 固定相-氨丙基氰丙基 流动相-以正己烷为底剂加入极性调节剂2.流动相的极性与保留因子的关系 极性强的组分的保留因子k 小先洗脱出柱流动相的极性增强洗脱能力减弱使组分 k 增大tR 增大反之k 减小 tR 减小1.分离机制 以RPIC分离碱类物质为例用离子对模式说明
吸附色谱库仑力蛋白酶抗体分离生物和医药分析2进样系统通常采用六通伐进样:3色谱柱(1)紫外-可见检测器荧光检测器结构示意图键合固定相非极性键合固定相: 键合在载体表面的功能分子是烷基苯基等非极性有机分子如最常用的ODS(Octa Decyltrichloro Silane)柱或C18柱就是最典型的代表其极性很小极性键合固定相: 键合在载体表面的功能分子是具有二醇基醚基氰基氨基等极性基团的有机分子
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