预习报告 实验七 动物细胞传代培养学生邵正尧 5130809007 班级F1308001 座位号 A06 同组同学席瑗苑 日期2015 年 11 月 16 日备注无 【Introduction】1 动物细胞培养技术动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织,使用胰蛋白酶或胶原蛋白酶将它分散成单个细胞,然后放在适宜的培养基中让这些细胞生长和增殖的过程。动物细胞培养技术可以如下分类:(1)根据
1细胞传代准备工作细胞传代所需培养液及试剂需提前放置于生物安全柜内预热至室温备用细胞传代材料滴管移液管培养器皿计数板橡皮乳头2细胞传代步骤人无菌室之前用肥皂洗手用75酒精擦拭消毒双手细胞传代前先在倒置显微镜下观察细胞形态确定细胞是否需要传代及细胞需要稀释的倍数观察打开超净工作台的紫外灯照射台面30 min左右关闭超净工作台的紫外灯打开抽风机清洁空气除去臭氧超净工作台面应整洁用75酒精溶液擦净贴壁细
概念:培养的细胞由于细胞增殖数量增加细胞难以继续生长繁殖需要进行分瓶培养将培养的细胞分散以1:2或l:3以上的比率转移到另外的容器中进行培养即为传代培养也叫做继代培养一般细胞可传代10-50代所谓细胞一代即从细胞接种到分离再培养的一段时间如某一细胞系为50代即该细胞已传代50次4加入12滴管含有血清的培养液反复吹打细胞使其成细胞悬液5以1:2或1:3进行分装补充新鲜培养基并在培养瓶上做好标记注明代
组织培养HeLa细胞传代早期的组织培养 1885年,Roux用温生理盐水培养鸡胚组织 ,首次采用Tissue culture1903年,Jolly用盖片悬滴法培养蝾螈白细胞1906年,Beebe 盖片悬滴培养狗淋巴细胞组织培养的建立 1907年,Harrison培养蛙胚神经成功,创建盖片凹玻璃悬滴培养法,公认为组织培养真正的开始1910年,Carrel完善悬滴培养法,将无菌技术应用到组织培养中组织
实验四 Hep-2细胞的传代培养五注意事项
实验四 动物细胞传代培养一实验目的1.掌握消化法细胞传代培养的原理2.了解细胞传代培养所需专用设备试剂3.学习细胞传代培养操作二实验原理动物细胞原代培养成功细胞生长增殖形成单层细胞后会进一步扩展汇合覆盖整个培养瓶底细胞会因生存空间不足或密度过大发生接触抑制并引起营养物质枯竭和代谢产物积累发生细胞中毒影响正常生长这时需要进行分离培养细胞由原培养瓶按1:2或1:3稀释后传到新的培养瓶的过程称之
传代细胞的培养和?维持一传代细胞的传代培养(1)吸除或倒掉原瓶中的旧培养基(以25mL培养瓶为例)(2)每瓶加入2mL无钙镁PBS漂洗一次后倒掉(3)每瓶加入1mL消化液(胰蛋白酶或EDTA或混合液)轻轻摇动培养瓶经消化液铺满所有细胞表面待细胞层略有松动肉眼可观察到薄膜现象时倒掉消化液再继续作用23分钟轻轻摇动细胞层可随残留的消化液呈片状从瓶壁上脱落下来在显微镜下可发现细胞回缩变圆细胞间隙增
初代培养原理 ? ? 将动物机体的各种组织从机体中取出经各种酶(常用胰蛋白酶)螯合剂(常用EDTA)或机械方法处理分散成单细胞置合适的培养基中培养使细胞得以生存生长和繁殖这一过程称原代培养? ???仪器材料及试剂 ? ? 仪器:培养箱(调整至37℃)培养瓶青霉素瓶小玻璃漏斗平皿吸管移液管纱布手术器械血球计数板离心机水浴箱(37℃) ? ? 材料:动物组织块 ? ? 试剂:1640培养基(含2
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