单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)测定蛋白质分子量授课教师: 一. 实验目的学习SDS-PAGE测定蛋白质分子量的原理掌握垂直板电泳的操作方法运用SDS-PAGE测定蛋白质分子量及染色鉴定 二 .实验原理带电质点在电场中向带有异相电荷的电极移
3. 当蛋白质的分子量在15000200000之间时电泳迁移率与分子量的对数值呈直线关系符合下列方程: 1gMr =K―bmR 式中:Mr为蛋白质的分子量K为常数b为斜率mR为相对迁移率在条件一定时b和K均为常数 若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量的对数作图可获得一条标准曲线未知蛋白质在相同条件下进行电泳
1. 标准蛋白质(Mark)与待检测蛋白样品2. 样品溶解液3. 30丙烯酰胺(丙烯酰胺Acr甲叉双丙烯酰胺Bis)4.凝胶缓冲液:SDS 加 磷酸盐缓冲液至100ml5. 1TEMED(NNN–四甲基乙二胺)过硫酸铵(AP)7.电极缓冲液:SDSmolL 磷酸盐缓冲液8.1琼脂:琼脂1g用上述缓冲液溶解至100ml 4℃保存9.固定液:甲醇:冰乙酸:水为1:2:710.染色液:考马斯亮蓝R–25
3. 当蛋白质的分子量在15000200000之间时电泳迁移率与分子量的对数值呈直线关系符合下列方程: 1gMr =K―bmR 式中:Mr为蛋白质的分子量K为常数b为斜率mR为相对迁移率在条件一定时b和K均为常数 若将已知分子量的标准蛋白质的迁移率对分子量的对数作图可获得一条标准曲线未知蛋白质在相同条件下进行电泳
SDS-PAGE电泳的问题Q:SDS-PAGE电泳的基本原理A:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS(十二烷基硫酸钠) SDS能断裂分子内和分子间氢键破坏蛋白质的二级和三级结构强还原剂能使半胱氨酸之间的二硫键断裂蛋白质在一定浓度的含有强还原剂的SDS溶液中与SDS分子按比例结合形成带负电荷的SDS-蛋白质复合物这种复合物由于结合大量的SDS使蛋白质丧失了原有的电荷状态
各项检验操作注意事项SDS-PAGE操作及注意事项制胶 按如下配方制备分离胶和浓缩胶 4浓缩胶(3ml) 10分离胶(4ml) AB-6 ×gel buffer 甘油(vv)
1. 配胶缓冲液系统对电泳的影响 在SDS-PAGE不连续电泳中制胶缓冲液使用的是Tris-HCL缓冲系统浓缩胶是分离胶而电泳缓冲液使用的Tris-甘氨酸缓冲系统在浓缩胶中其pH环境呈弱酸性因此甘氨酸解离很少其在电场的作用下泳动效率低而CL离子却很高两者之间形成导电性较低的区带蛋白分子就介于二者之间泳动由于导电性与电场强度成反比这一区带便形成了较高的电压剃度压着蛋白质分子聚集到一起浓缩为
实验七 SDS-电泳法测定 蛋白质分子量 实验目的学习并掌握SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法和测定蛋白质分子量的技术实验原理1、蛋白质混合样品中各蛋白质组分的分子大小和形状以及所带电荷多少等因素所造成的电泳迁移率有差别。在聚丙烯酰胺凝胶系统中,加入一定量十二烷基硫酸钠(SDS),形成蛋白质-SDS复合物,这种复合物由于结合了大量的SDS,使蛋白质丧失了原有的电荷状态,形成了仅保持原有分子大小为特征
蛋白电泳及印迹技术(一)SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质一目的与要求 1.学习电泳原理和技术 2.学习和掌握SDS-聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳分离蛋白质技术1.电泳的基本原理带电荷的质点在一定条件的电场作用下可向一极移动这种现象称为电泳生物分子所带电荷的多少取决于分子性质及其所在介质的pH及其组成混合物中各组分所带电荷性质电荷数量以及分子量和形状的不同在相同电场力的作用下
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)实验原理和操作步骤实验原理:SDS-PAGE是对蛋白质进行量化比较及特性鉴定的一种经济快速而且可重复的方法该法是依据混合蛋白的分子量不同来进行分离的SDS是一种去垢剂可与蛋白质的疏水部分相结合破坏其折叠结构并使其广泛存在于一个广泛均一的溶液中SDS蛋白质复合物的长度与其分子量成正比在样品介质和凝胶中加入强还原剂和去污剂后电荷因素可被忽略蛋白亚基的迁移率
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