第25卷第6期
万方数据
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分子生物学实验当你翻开书本的时候,你必须尽可能地展开想象的“翅膀”,否则,你就不能走在别人的前面;而当你进入实验室时,要象脱下你的外衣那样脱下你的想象力,因为实验操作中不能有一丁点儿的想象,否则,你对事物的观察就会受到影响。实验相关知识1、实验准备:2、实验室安全与卫生3、分组与实验操作4、实验报告与成绩评定离心机的使用移液器的使用实验一、质粒DNA的提取纯化实验目的:学习与掌握最常用的质粒DNA
质粒DNA的提取与酶切电泳鉴定质粒提取关键:基因组DNA与质粒DNA的有效分离 (碱裂解法) 高pH使质粒DNA和染色体DNA变性同时沉淀蛋白质再将pH值调至中性质粒DNA较小很容易复性成双链而染色体DNA较大不会复性缠结成网状不溶物质从而可以通过离心除去注意事项:实验方法 碱裂解法 1挑取携带目标DH5α单菌落于3-5 ml LB(含Amp 100μgml)37℃ 振荡培养过夜(12
总DNA 质粒 重提质粒酶切检测 PCR检测 质粒酶切后回收产物的检测 重提质粒检测 快检 PCR酶切产物的检测图 :
实验六大肠杆菌质粒DNA的提取及检测基础性实验 实验目的 掌握碱裂解法提取大肠杆菌质粒DNA的原理和方法。掌握离心机、移液器、震荡培养箱的正确使用方法。了解不同构型的质粒DNA在琼脂糖凝胶中泳动速率的差异。实验原理质粒是存在于细菌染色体外的能够自主复制的环状DNA分子。大小在1~200kb之间,质粒DNA通常以游离状态持续稳定地处于染色体外(在一定的条件下又会可逆地整合到寄主染色体上),随着染色
实验11质粒DNA的提取与琼脂糖凝胶电泳1 实验目的掌握碱裂解法提取质粒的原理和方法掌握琼脂糖凝胶电泳分离鉴定DNA的原理和方法2 实验原理质粒质粒(plasmid)是在细菌中以独立于染色体之外的方式存在是细菌染色体外的小型双链环状DNA复制子理论上讲所有的细菌株系都含有质粒有些质粒携带有帮助其自身从一个细胞转入另一个细胞的信息即F质粒有些则表达对一种抗生素的抗性即R质粒还有一些携带的是参与或控制
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分子生物学实验质粒提取Plasmid ExtractionEP管(eppendorf管)操作(理论上无菌)量程可调的微量移液器使用溴乙锭,致癌!报纸区域为污染区1)取15ml过夜培养的菌液于EP管,9000rpm离心30秒(一起离),弃尽上清。2)用250μl溶液P1重悬沉淀,枪头反复抽吸至菌体彻底悬浮。3)加250μl溶液P2,温和地上下翻转4~7次使菌体充分裂解,室温放置3min,直到溶液变得
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