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Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上然后利用抗体进行检测对已知表达蛋白可用相应抗体作为一抗进行检测对新基因的表达产物可通过融合部分的抗体检测本文主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术:一原理二?分类i.放射自显影ii.底物化学发光ECLiii.底物 =78 t _blank 荧光ECFiv.底物DAB呈色三?主要试剂四?主要步骤五?
Western Blot为什么必须要用内参[心得点评] 要检测一个基因的表达产物是否正确或者比较表达产物量的相对变化首选方法是Western Blot因为Western Blot操作相对简单方便既可以定性分析表达产物同时还可以指示目的蛋白量的相对变化虽然顺利的时候Western Blot做起来很简单可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦假阳性啦结果出现多条带啦到底是一抗有问题还是二抗有问题啦……
SDS-PAGE电泳及Western blot分析 ⑴试剂溶液的配制30的丙烯酰胺(Acr):丙烯酰胺29g双丙烯酰胺 1g加灭菌蒸馏水定容至100ml37℃加热使溶解4℃避光保存如果有杂质可过滤成层胶缓冲液:Tris gSDS g先用50ml灭菌蒸馏水溶解再用浓盐酸调pH值至定容至100ml4℃保存分离胶缓冲液:Tris gSDS g先用50ml灭菌蒸馏水溶解再用浓盐酸调pH值至定容至1
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你作的是否为磷酸化的抗体若是5脱脂奶粉封闭液会对结果产生影响这时你可以考虑用BSA试试2. 背景比较高的解决方法:1)降低12抗浓度我们用的晶美的2抗稀释度甚至达到了1:200002)延长洗膜次数和时间3)降低曝光时间背景过高的解决方法:1.降低抗体浓度降低孵育时间夏天气温高同等条件下抗体结合率很高宜注意2.牛奶变质3.牛奶封闭时间不够我一般是室温封闭4个小时或4度过夜理论上越长越好4.抗体特异性
2011-5-7转膜封闭一抗杂交二抗杂交底物显色七二抗与底物反应显色 Santa cruz Cell signaling Invitrogen Sigma Abcam RD Abnova Chemicon Calbiochem Millipore BD Cayman Roche eBioscience et al.标本制备二聚体或者多聚体:增加上样前煮沸变性时间蛋白不同剪切体或者 isofo
Western Blotting Workflow(免疫印迹解决手册) ——给您提供便利快捷全面的解决方略目 录 TOC o 1-4 h z u HYPERLINK l _Toc307406322 HYPERLINK l _Toc307406323 1 Western Blot简介 PAGEREF _To
【求助】关于一抗二抗验证问题请问各位我怀疑我的一抗二抗出问题了如何验证啊之前有位前辈说是用一个确定有用的二抗来验证我的一抗直接把一抗加在膜上再加新的二抗然后显影请容许我问个很傻的问题那之前还要跑电泳和转膜然后再加一抗和二抗么还是不需要跑蛋白质直接用一个新的膜然后加一抗二抗请大家不要笑话我哈还有就是国产的抗体效价一般比较低的话一般什么比例比较合适一点我用的是的抗体hustwb不用跑电泳其实
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