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Click 注意 1)限制性核酸内切酶的类型及特性按限制酶的组成与修饰酶活性关系以及切断核酸的情况不同分为三类: Ⅰ型 Ⅱ型 Ⅲ型EcoR I 酶切位点:GAATTCHind Ⅲ 酶切位点: 未酶切质粒2. EcoRI 单酶切3. EcoR1Hind Ⅲ双酶切M. DNA Marker.
质粒DNA的提取与酶切电泳鉴定质粒提取关键:基因组DNA与质粒DNA的有效分离 (碱裂解法) 高pH使质粒DNA和染色体DNA变性同时沉淀蛋白质再将pH值调至中性质粒DNA较小很容易复性成双链而染色体DNA较大不会复性缠结成网状不溶物质从而可以通过离心除去注意事项:实验方法 碱裂解法 1挑取携带目标DH5α单菌落于3-5 ml LB(含Amp 100μgml)37℃ 振荡培养过夜(12
质粒DNA的提取纯化及验证一实验目的掌握碱变性提取法的原理及各种试剂的使用并掌握凝胶电泳进行DNA的分离纯化的实验原理和方法二实验原理1碱变性提取法提取和纯化质粒DNA的方法很多目前常用的有:碱变性提取法煮沸法羟基磷灰石柱层析法EB一氯化铯密度梯度离心法和Wizard法等其中碱变性提取法最为经典和常用适于不同量质粒DNA的提取该方法操作简单易于操作一般实验室均可进行提取的质粒DNA纯度高可直接用于
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万方数据
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1. 实验目的 学习和掌握限制性内切酶的特性掌握对重组质粒进行限制性内切酶酶切的原理和方法 并理解限制性内切酶是DNA重组技术的关键工具 如Xba1和Nhe1: 5…TCTAGA…3 5…GCTAGC…3 3…AGATCT…5 3…CGATCG…5 5…T CTAGA…3 5…G CTAGC…3 3…AGATC T…5 3…CGATC G…
实 验 七 质粒DNA的提取和鉴定 目的 掌握碱裂解法提取质粒的方法 了解质粒酶切鉴定原理质粒DNA能从细菌中提出来又能再转入细菌这个过程称转化转入的质粒DNA仍能进行复制产生多个拷贝提纯的思路质粒的特性:共价闭合环状的小分子量DNA要去除的物质: 蛋白 基因组DNA 脂类及小分子杂质 RNA 质粒DNA的提取方法方法:碱裂解法煮沸裂解羟基磷灰石柱层析法质粒DNA释放法酸酚法等
质粒DNA的提取和纯化 郑敏生化与分子生物学系分子生物学从分子水平上研究生命现象物质基础的学科。研究细胞成分的物理、化学的性质和变化以及这些性质和变化与生命现象的关系,如遗传信息的传递,基因的结构、复制、转录、翻译、表达调控和表达产物的生理功能,以及细胞信号的转导等。 基因工程移液器和EP管质 粒质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中,独立于染色体之外的、能自主复制的双链环状脱氧核糖核酸物质。质粒
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