实时荧光定量PCR技术的原理及应用(Real time Quantitative PCR)讲 座提纲 实时荧光定量PCR原理 实时荧光定量PCR的几种方法介绍实时荧光定量PCR原理 实时荧光定量PCR的几种方法介绍 实时荧光定量技术的应用实时荧光定量PCR定义在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程,最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法 实时荧光定量PCR 原
实时荧光定量PCR技术的原理及应用(Real time Quantitative PCR)北京天为时代科技有限欧阳志荃2005-06-02天为时代核酸系列讲座之南京农业大学讲 座提纲 实时荧光定量PCR原理 实时荧光定量PCR的几种方法介绍 实时荧光定量PCR医学和科研中的应用 实时荧光定量PCR原理 实时荧光定量PCR的几种方法介绍 实时荧光定量PCR医学和科研中的应用实时荧光定量PCR定义
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级 实时荧光定量PCR技术的原理及应用 (Real time Quantitative PCR) 分子生物学技术平台
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级实时荧光定量PCR(Real time Quantitative PCR)定义 在PCR反应体系中加入荧光基团利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法 普通PCR与Real-time PCR的区别普通PCRR
Real-time PCR for mRNA quantitation一、原理实时荧光定量PCR技术是通过检测PCR产物中荧光讯号强度来达到定量PCR产物的目的,目前该技术已在动植物基因工程,微生物和医学领域中得到广泛应用。实时定量PCR包括探针法和染料法两种,探针法是利用与靶序列特异杂交的探针来指示扩增产物的增加,特异性高,如Taq ManTM技术;染料法则是利用染料来指示扩增的增加,特异性
miRNA实时荧光定量PCR实时荧光定量PCR从1996年美国Applied Biosystems推出实时荧光定量PCR技术以来该技术已经越来越广泛的应用到各类RNA的研究中成为研究RNA必不可少的实验手段之一目前比较常用的方法有两种:(1)TaqMan荧光探针法:该方法在特异性探针的两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团当探针完整时荧光基团发光被淬灭基团吸收在PCR扩增过程中探针被降
实时定量PCR技术 定量PCR阈值与C(t)值C(t) value 初始模板量对数---C(T)循环数标准曲线浓度的对数值与循环数呈线性关系根据样品扩增达到域值的循环数(Ct值)就可分析样品中起始模板量化学试剂有104熔链曲线分析Tm适用范围验证试验样品扩增:正常vs肿瘤Multiplex Reactions: C(t)GAPDH表达故障排查---软件界面精密度高
实时荧光定量PCR仪品牌:美国Bio-Rad型号:CFX96技术要求及配置:1.1检测容量:96×0.2ml普通PCR反应管 可以使用单个PCR管8联反应条96孔反应板1.2反应体积:5-30μl1.3升降温方式:半导体加热制冷1.4最大升温速度:5℃秒1.5最大降温速度:5℃秒1.6温度控制范围:0-100℃1.7温度精确度:±0.2℃1.8温度均一性:±0.4℃1.9具有温度梯度功能温度
微基生物您自己的微生态研究团队 实时荧光定量 PCR 技术简介实时荧光定量 PCR(Quantitative Real-time PCR)是一项以 PCR 反应为基础的 DNA 定量技术,通过对目标基因在扩增过程中产生的拷贝数进行实时的定量,从而达到对目的基因的定性和定量分析。现有两种常用的方法对 PCR 产物进行荧光定量:一种是利用荧光染料与双链 DNA 结合,通过荧光强度进行定量;另一种是利用
利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化最终精确地对起始模板定量分析阈值(Xn):荧光扩增曲线指数扩增期的荧光强度标准(PCR扩增产物量的标准)C(t)值(n):荧光信号(扩增产物)到达阈值时所经过的扩增循环次数常用荧光检测方法SYBR非特异性TaqMan特异性与扩增的片断配对熔解曲线分析定量和检测目标基因双标准曲线法结果精确对扩增效率要求不高构建目标基因与内标基因的标
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