分离纯化蛋白质的方法及原理(一)利用分子大小1透析:原理:利用蛋白质分子不能透过半透膜的性质使蛋白质和其他小分子物质如无机盐单糖水等分开 方法:将待提纯蛋白质放在透析袋中放在蒸馏水中进行 涉及的问题: 如何加快透析过程加大浓度差及时更换透析液利用磁力搅拌器 常用的半透膜:玻璃纸火棉和其他材料合成2超过滤:原理:利用压力和离心力强行使其他小分子和水通过半透膜而蛋白质留在膜上3凝胶
蛋白质的分离纯化方法沉淀法:原理:是使蛋白质胶体颗粒的表面水化膜或表面电荷破坏从而使蛋白质沉淀盐析法有机溶剂沉淀法等点电沉淀法选择性变性沉淀法聚合物沉淀法在生物大分子制备中最常用的几种沉淀方法是:中性盐沉淀(盐析法):最大的特点是环境温和不易造成蛋白质变性因此适用于各种蛋白质和酶的分离纯化缺点是分辨率底且后续处理时需要除盐 有机溶剂沉淀:分辨率高于盐析法但容易引起目的蛋白失活所以多用于生物小分子
蛋白质的分离与纯化蛋白质分离纯化的基本流程 选择材料和预处理 细胞的破碎及细胞器的分离 蛋白质的抽提 蛋白质的纯化 浓缩干燥和保存一材料的选择和预处理 微生物植物和动物都可做为制备蛋白质的原材料所选用的材料主要依据实验目的来确定 从工业生产角度考虑注意选含量高来源丰富及成本低的原料 对动物组织必须选择有效成份含量丰富的脏器组织为原材料先除去结缔组织和脂肪组织 对预处理好的材料若不立即
蛋白质分离纯化及蛋白质测定方法及评价一、 蛋白质分离纯化方法 研究蛋白质或酶的物理及化学性质,首先需进行纯化 若要研究蛋白质或酶的主体结构及酶的活性中心,催化反应机理等,则还需清除最后残留在分子中的微量其它蛋白和大分子化合物分离蛋白质及酶类要顾及最大的生产量要顾及最大的催化活性要使蛋白及酶纯度尽可能达到最高1 蛋白质分离纯化的技术路线设计及条件蛋白质的分离纯化不可能有一个固定的程序适用于各种蛋白质
蛋白质分离纯化常用哪些方法 蛋白质分离纯化方法有: 1沉淀 2电泳:蛋白质在高于或低于其等电点的溶液中是带电的在电场中能向电场的正极或负极移动根据支撑物不同有薄膜电泳凝胶电泳等 3透析:利用透析袋把大分子蛋白质与小分子化合物分开的方法 4层析: a.离子交换层析利用蛋白质的两性游离性质在某一特定PH时各蛋白质的电荷量及性质不同故可以通过离子交换层析得以分离如阴离子交换层析含负电量小的蛋白
实验一 氨基酸的分离鉴定——纸层析法实验目的学习氨基酸纸层析的基本原理掌握氨基酸纸层析的操作技术实验原理纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法层析溶剂由有机溶剂和水组成滤纸和水的亲和力强与有机溶剂的亲和和弱因此在展层时水是固定相有机溶剂是流动相将样品点在滤纸上(原点)进行展层样品中的各种AA在两相溶剂中不断进行分配由于它们的分配系数不同不同AA随流动相移动速率就不同于是将这些AA分离开来
蛋白质分离纯化的新技术2008-03-28 20:00生物技术的发展非常迅速基因工程蛋白质工程发酵工程等生物技术已经能设计制造生产人们急需的多种蛋白质 和其它生物产品的生产过程一样蛋白质的生产过程一般也分为上中下游过程上中游过程是运用生物技术生产目标产物下游过程是指对含有目标产物的物料进行处理分离纯化加工目标产物本文主要综和近年来国内外的研究结果介绍了蛋白质的最新分离纯化技术 2. 蛋白质的
蛋白质纯化的一般原则及方法选择点击次数: 1849? :佚名 发表于:2008-08-20 17:11 请注明来自丁香园 来源:互联网?随着分子生物学的发展越来越多的科研人员熟练掌握了分子生物学的各种试验技术并研制成套试剂盒使基因克隆表达变得越来越容易lIl但分子生物学的上游工作往往并非是最终目的分子克隆与表达的关键是要拿到纯的表达产物以研究其生物学作用或者大量生产出可用于疾病治疗的生物制
凝胶基质一凝胶的处理 Sephadex G-100干粉经蒸馏水室温充分溶胀48h或沸水浴中煮沸2h冷却至室温后抽真空脱去颗粒空隙中的空气
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