凝胶基质一凝胶的处理 Sephadex G-100干粉经蒸馏水室温充分溶胀48h或沸水浴中煮沸2h冷却至室温后抽真空脱去颗粒空隙中的空气
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级凝胶过滤层析法分离血红蛋白化学生物学实验药学院 化学生物学教研室1.实验目的初步了解凝胶过滤层析法的简单原理及应用初步掌握应用凝胶过滤法分离蛋白质 1 22.实验原理 层析法是利用混合物中各组分物理经学性质的差别(如吸附力溶解度分子形状大小和极性等)
实验二、葡聚糖凝胶柱层析1、目的与要求: 11、学习凝胶(Gel)层析法的基本原理; 12、掌握葡聚糖凝胶(Sephadex)柱层 析的操作技术。2、概述及原理: 凝胶 是一类不溶于水,在水中却有较大膨胀度和较好的分子筛功能,具有立体网状结构的物质(如葡聚糖、琼脂糖、聚丙烯酰胺等)。 21、能用于层析的凝胶主 要有下面几种: 目前主要有葡聚糖凝胶(商品名为Sephadex),天然琼脂
蛋白质含量的测定(考马斯亮蓝法和Fulin酚法) 8学时 正交法寻找蔗糖酶的最适反应条件 8学时_:::赵永芳. 生物化学技术原理及应用.北京. 科学出版社.2002沈同 王镜岩.生物化学.高等教育出版社.2002高效液相色谱仪凝胶层析原理实验步骤(一)卵球蛋白的沉淀7—
【实验用品】 1材料葡聚糖凝胶Sephadex G-100蓝色葡聚糖2000溶菌酶 2试剂(1)蓝色葡聚糖-2000(2mgmL)和溶菌酶(6mgmL)组成的混合液(2)乙酸缓冲液 3器具色谱柱铁架台试管紫外分光光度计或紫外检测仪电炉容量瓶烧杯三角瓶滴管移液管玻棒
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级第五章 蛋白质的分离纯化 (一)材料 1选材 2破碎 3混合物的分离 (二)粗分级 (三)细分级 蛋白质粗分级一盐析盐析:蛋白质在高浓度中性盐溶液中会沉淀析出 常用硫酸铵进行沉淀分级沉淀:通过调节硫酸铵的浓度可以使不同的蛋 白质分阶段沉淀下来优点:价格
蛋白质的分离与纯化蛋白质分离纯化的基本流程 选择材料和预处理 细胞的破碎及细胞器的分离 蛋白质的抽提 蛋白质的纯化 浓缩干燥和保存一材料的选择和预处理 微生物植物和动物都可做为制备蛋白质的原材料所选用的材料主要依据实验目的来确定 从工业生产角度考虑注意选含量高来源丰富及成本低的原料 对动物组织必须选择有效成份含量丰富的脏器组织为原材料先除去结缔组织和脂肪组织 对预处理好的材料若不立即
蛋白质分离纯化及蛋白质测定方法及评价一、 蛋白质分离纯化方法 研究蛋白质或酶的物理及化学性质,首先需进行纯化 若要研究蛋白质或酶的主体结构及酶的活性中心,催化反应机理等,则还需清除最后残留在分子中的微量其它蛋白和大分子化合物分离蛋白质及酶类要顾及最大的生产量要顾及最大的催化活性要使蛋白及酶纯度尽可能达到最高1 蛋白质分离纯化的技术路线设计及条件蛋白质的分离纯化不可能有一个固定的程序适用于各种蛋白质
不同大小的蛋白质分子进入胶体过滤管柱可依其分子量差异分离是一种广泛应用的partition色析法 (Pharmacia操作手册 Gel Filtration)仪器设备:色析管柱 (Pharmacia C column ×100 cm)铁架铁夹及水平仪部分收集器(fraction collector 需准备干净试管约100 支)浓缩用离心机 (低速5000 rpm)浓缩用离心管Centriprep-
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