碱性蛋白酶活力测定【实验目的】 1.?掌握测定碱性蛋白酶活力的原理和酶活力的计算方法 2.?学习测定酶促反应速度的方法和基本操作 【实验原理】 酶活力是指酶催化某些化学反应的能力酶活力的大小可以用在一定条件下它所催化的某一化学反应的速度来表示测定酶活力实际就是测定被酶所催化的化学反应的速度 酶促反应的速度可以用单位时间内反应底物的减少量或产物的增加量来表示为了灵敏起见通常是测定单位时间内产物的生成
胰蛋白酶活性测定在动物胰脏中胰蛋白酶是以无活性的酶原状态存在的在生理条件下胰蛋白酶原随胰液分泌至十二指肠后在小肠上腔有Ca2的环境中为肠激酶或胰蛋白酶所激活其肽链?N?-端的赖氨酸与异亮氨酸之间的一个肽键被水解失去一个酸性6肽其分子构象发生一定的改变后转变为具有催化蛋白质水解活性的胰蛋白酶胰蛋白酶原分子量约为24?000其等电点为pH8.9胰蛋白酶的分子量约为23?400其等电点为pH?10
蛋白酶活力的测定实验目的 1了解碱性蛋白酶活力测定的原理 2掌握碱性蛋白酶活力测定的方法实验原理蛋白酶在一定条件下不仅能够水解蛋白质中的肽键也能够水解酰胺键和酯键因此可用蛋白质或人工合成的酰胺及酯类化合物作为底物来测定蛋白酶的活力本实验选用酪蛋白为底物测定微生物蛋白酶水解肽键的活力酪蛋白经蛋白酶作用后降解成相对分子质量较小的肽和氨基酸在反应混合物中加入三氯醋酸溶液相对分子质量较大的蛋白质和肽就沉淀
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蛋白酶活性的测定方法(GB/T23527-2009)1 原理 蛋白酶对酪蛋白、乳清蛋白、谷物蛋白等都有很好的水解作用。磷钨酸和磷钼酸混合试剂,即福林-酚试剂,碱性条件下极不稳定,易被酚类化合物还原而呈蓝色反应(钨兰和钨兰混合物)。由于蛋白质中含有具有酚基的氨基酸(酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸),因此,蛋白质及其水解产物也呈此反应。利用蛋白酶分解酪素(底物)生成含酚基氨基酸的呈色反应,来间接测定蛋白
米曲霉的蛋白酶活力测定:紫外分光光度法:0.4molL三氯醋酸溶液:称取三氯醋酸定容至1000ml磷酸缓冲溶液:称取磷酸二氢钠定容至1000ml成溶液(A液)称取磷酸氢二钠定容至1000ml成溶液(B液)取A液28ml和B液再用蒸馏水稀释1倍即成的磷酸缓冲溶液 2酪蛋白溶液:称取酪蛋白2g加入氢氧化钠20ml在水浴中加热溶解(必要时用小火加热煮沸)然后用磷酸缓冲液定容至1000ml即
二实验原理管号酚试剂 (ml)三氯醋酸(ml)40℃水浴保温10分钟过滤得滤液 1胰酶活力定义: 40 ℃ 反应10min每分钟水解酪蛋白产生酪氨酸 1 微克为一个酶活力单位计算:1g 蛋白酶所具备的总活力单位为: ( A 样 - A 对)× K × Vt × N A 样 :样品液光吸收值 A 对 :对照液光吸收值 K :标准曲线上A680nm为 1 时
蛋白酶的制备及活力的测定 目的要求1.学习胰蛋白酶的纯化及其结晶的基本方法2.了解酶的活性与比活性的概念实验原理胰蛋白酶是以无活性的酶原形式存在于动物胰脏中在Ca2的存在下被肠激酶或有活性的胰蛋白酶自身激活从肽链N端赖氨酸和异亮氨酸残基之间的肽键断开失去一段六肽分子构象发生一定改变后转变为有活性的胰蛋白酶胰蛋白酶原的分子量约为24000其等电点约为胰蛋白酶的分子量与其酶原接近(23300)其等电点
各 H2O (mL)
实验 胰蛋白酶活力测定一原理福林—酚试剂中的磷钨酸和磷钼酸在碱性条件下极不稳定易被酚类化合物还原为蓝色化合物(钨蓝和钼蓝)蛋白质中含具酚基的氨基酸(酪氨酸色氨酸苯丙氨酸)用胰蛋白酶水解蛋白底物生成含酚基的氨基酸与福林—酚试剂反应生成蓝色化合物在一定的范围内蓝色化合物颜色的深浅与酶活力的大小成正比二实验仪器试管7220分光光度计恒温水浴锅三实验试剂福林试剂B:见福林(Folin)-酚试剂法测定蛋白质
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