各 H2O (mL)
血清碱性磷酸酶活性测定磷酸苯二钠法小组成员:程展鹏,杨秋月,陈敬根,卢昆实验目的熟悉酶活性测定方法的一般原理掌握血清ALP测定原理与临床意义实验原理在PH10 环境中,ALP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠,苯酚与4-氨基安替比林反应生成色素原,该色素原经铁氰化钾氧化生成红色醌亚衍生物。测定红色物质的吸光度就可以计算酶活性的大小。反应式如下:ALP磷酸苯二钠+H2O苯酚+磷酸氢二钠 pH1
实验六小牛肠碱性磷酸酶的提纯及比活力测定实验目的掌握小牛肠碱性磷酸酶的提取及酶活力测定的原理和方法酶活力: 在最适反应条件(25℃)下,每分钟内催化1?mol底物转化为产物所需的酶量为一个酶活力单位,即1U=1?mol/min。酶的比活力: 代表酶的纯度,用每mg蛋白质所含的酶活力单位数表示。比活力=活力(U)/蛋白(mg)=总活力(U)/总蛋白(mg)酶活力的测定方法: 分光光度法;荧光法;同
酶促反应模式——中间产物学说Km[S] Km1V 1[S] 酶浓度对反应速度的影响 低温的应用最适pH (optimum pH):酶催化活性最大时的环境pH碱性磷酸酶[s]
1.了解底物浓度对酶促反应速度的影响2.了解米孟方程Km值的物理意义及双倒数作图求Km的方法当反应速度为最大反应速度一半时V(林-贝氏方程)
酶法分析 指应用酶作为工具定量测定某种物质含量的分析方法(一)单酶反应定量法1直接测定底物的含量2由辅酶变化量测定底物量(二)偶联酶反应定量法 E1 E2A B C注意事项1.底物溶液中不应含有游离酚如有酚则空白管显红色说明磷酸苯二钠已经开始分解应弃去不用2.铁氰化钾溶液中加入硼酸有稳定显色作用
碱性磷酸酶 碱性磷酸酶( ALP 或 AKP )是广泛分布于人体肝脏骨骼肠肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶这种酶能催化核酸分子脱掉5磷酸基团从而使DNA或RNA片段的5-P末端转换成5-OH末端但它不是单一的酶而是一组同功酶目前已发现有 AKP1 AKP2 AKP3 AKP4 AKP5 与 AKP6 六种同功酶其中第 1 2 6 种均来自肝脏第 3 种来自骨细胞第 4 种产生于
第二部分 碱性磷酸酶Km测定一实验目的掌握碱性磷酸酶的的动力学鉴定—Km鉴定二实验原理当温度pH 及酶浓度恒定的条件下酶促反应的初速度随作用物浓度[S]增 大而增大但增大到一定限度时作用物浓度再增加则反应速度不再增加此 时反应速度为最大速度(Vmax)Michaelis Menten 对酶促反应速度与作用物浓 度之间的这种关系进行了大量实验研究并于 1913 年提出了数学方程式即著名的米一曼方程
International Federation of Clinical Chemistry and Laboratory Medicine (IFCC)Scientific Divisiomittee on Reference Systems for Enzymes (C-RSE)IFCC Primary Reference Procedures for the Measureme
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