免疫荧光(Immunofluorescence IF)实验方法免疫荧光技术是在免疫学生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术它是根据抗原抗体反应的原理先将已知的抗原或抗体标记上荧光基团再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检查细胞或组织内的相应抗原(或抗体)利用 HYPERLINK t _blank 荧光显微镜可以看见荧光所在的细胞或组织从而确定抗原或抗体的性质和定位以及利用定量技
活细胞免疫荧光技术-流式细胞仪标本的制备(一)制备活性高的细胞悬液(培养细胞系外周血单个核细胞 胸腺细胞脾细胞等均可用于本法) ↓ 用10FCS RPMI1640调整细胞浓度为 5×1061×107/ml ↓ 取40μl细胞悬液加入预先有特异性McAb(550μl)
免疫荧光protocol固定:用4的多聚甲醛(PFA)在室温下固定15min用PBS洗三次每次5min用封闭液(5BSA-triton定位于细胞浆和细胞核的蛋白要用triton封闭液用PBS配制即可)在室温下封闭1h移除封闭液加入一抗(一抗用1BSA稀释)置于4度孵育过夜用PBS洗三次每次至少5min(这样背景没那么深)加入二抗(1:1001:200二抗用1BSA)在室温下避光孵育1h(1h-2h
试剂固定液: 称取2g多聚甲醛(Sigma),加入5ml 10×PBS、30ml去离子水,置于65℃水域加热溶解1~15小时(搅拌加速溶解),待溶解完全后冷却至室温,加入5g蔗糖,待蔗糖溶解完全后,加去离子水至50ml,混匀,4℃保存1×PBS:将10×PBS用去离子水稀释10倍,高温高压灭菌,室温保存渗透液:10×PBS 10ml,20% TritonX-100 05ml,加去离子水至100
免疫荧光组化技术主要内容一、荧光的特征二、荧光素三、荧光素标记抗体的方法四、荧光抗体的质量鉴定五、免疫荧光组化染色方法六、荧光显微镜七、非特异性荧光的消除方法八、激光扫描共聚焦显微镜思考题:1什么叫荧光?2常用荧光素有哪些特征?3免疫荧光组化直接法、间接法的原理和主要操作流程?4观察荧光组化片时应注意哪些问题?5非特异性荧光的消除方法有哪几种?一、荧光的特征分子都含有
几种ENA的由来及同义词人特异性抗体样品2实验步骤五:冲洗实验步骤十:结果判断【着丝点型】阴性标本中未检测到抗核抗体
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直接免疫荧光法测抗原基本原理 将荧光素标记在相应的抗体上直接与相应抗原反应其优点是方法简便特异性高非特异性荧光染色少缺点是敏感性偏低而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体此法常用于细菌病毒等微生物的快速检查和肾炎活检皮肤活检的免疫病理检查试剂与仪器l 磷酸盐缓冲盐水(PBS): 荧光标记的抗体溶液:以的PBS进行稀释l 缓冲甘油:分析纯无荧光的甘油9份 碳酸盐缓冲液1份配制l 搪瓷桶三只(内
免疫荧光(IF法)检测技术.doc :
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