单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级一维蛋白质电泳的方法及显色方法 辉骏生物：:.fitgene 免费服务热线：400-699-16631: 一维蛋白质电泳方法的分类 (1): SDS-PAGE (2): CTAB-PAGE (3): 酸-尿素连续PAGE (4): Tricine-SDS

原核表达及检测摘 要：本实验采用IPTG诱导GFP在大肠杆菌中的表达表明随着时间的推移GFP的表达量越来越多随后用SDS-PAGE检测蛋白纯化情况 关键词：原核表达 SDS-PAGE凝胶电泳 广义的原核表达是指发生在原核生物内的基因表达狭义的原核表达常出现于生物工程中是指通过基因克隆技术将外源目的基因通过构建表达载体并导入表达菌株的方法使其在特定原核生物或细胞内表达一个完整的表达系

单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)测定蛋白质分子量授课教师： 一. 实验目的学习SDS-PAGE测定蛋白质分子量的原理掌握垂直板电泳的操作方法运用SDS-PAGE测定蛋白质分子量及染色鉴定 二 .实验原理带电质点在电场中向带有异相电荷的电极移

SDS-PAGE分离胶(即下层胶)：SDS-PAGE分离胶浓度最佳分离范围6胶50-150kD8胶30-90kD10胶20-80kD12胶12-60kD15胶10-40kD成分配制不同体积SDS-PAGE分离胶所需各成分的体积(毫升)8胶51015203050蒸馏水2.34.66.99.313.923.230Acr-Bis(29:1)1.32.74.05.38.013.31M TrispH8

SDS-PAGE电泳操作步骤：试剂配制：(实验中采用均为分析纯)(1)丙烯酰胺贮液 (4℃下棕色瓶中储存试剂尽量勿存储过久)丙烯酰胺贮液(T=30C=3)称取29.1 g丙烯酰胺和0.9 g甲叉双丙烯酰胺用双蒸水溶解定容至100 ml过滤备用(试剂有毒操作中注意防护)(2)浓缩胶缓冲液(1 molL Tris-HClpH 6.8)(4℃下棕色瓶中储存试剂尽量勿存储过久)6.06 g Tri

蛋白电泳及印迹技术(二) 蛋白质印迹分析技术(Western Blotting)一目的与要求 应用蛋白质印迹分析技术分析经SDS-PAGE电泳分离并转移到硝酸纤维素薄膜上的细胞特定蛋白成分二实验原理经SDS-PAGE分离后的蛋白质样品通过电转移固定在固相支持物(如：硝酸纤维素薄膜)上固相支持物以非共价键形式吸附蛋白质以固相支持物上的蛋白质作为抗原与相应的抗体即第一抗

几乎所有蛋白质电泳分析都在聚丙烯酰胺凝胶上进行而所有条件总要确保蛋白质解离成单个多肽亚基并进可能减少其相互间的聚集最常用的就是SDS－PAGE电泳技术关于大家在此过程中经常遇到的问题进行一些讨论：Q：SDS－PAGE电泳的基本原理A：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS(十二烷基硫酸钠)SDS会与变性的多肽并使蛋白带负电荷由于多肽结合SDS的量几乎总是与多肽的分子量成

单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级蛋白质的分离提取SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及Western印迹蛋白质的分离提取蛋白质分子在水溶液中因其表面带有一定数量的电荷及形成水化膜使其成为稳定的胶体颗粒在某些物理或化学因素影响下蛋白质颗粒由于失去电荷和水化膜而沉淀中性盐重金属盐三氯乙酸和乙醇等都是常用的沉淀蛋白质的试剂 Ⅰ蛋白质的盐析大量中性盐类如硫酸铵(NH4)2SO