细胞转染药物筛选(试行)第一天细胞复苏1从液氮罐取出一管细胞)迅速置于37℃水浴锅中溶化2和9ml FBS-DMEM(双抗)一起转移到14-ml的离心管中3离心1000rpm 5min负压吸去上清4用FBS-DMEM(双抗)重悬细胞铺到6孔板上(2ml液体)12hr后若死细胞很多需换液1负压吸去培养基2加入2ml新鲜的FBS-DMEM(双抗)第三天细胞传代1负压吸去培养基加入2ml PBS吸去PB
细胞转染生05边晔 2010030026周二班 同组同学:解智博实验时间:2012年11月28日周三实验背景转染将大分子(DNA)转导至真核细胞中。转染方法(主要从毒性,效率,成本考虑)重组DNA 病毒感染法外源基因大小有一定限制;安全性较低显微注射法 不适合大量细胞的基因导入,一次操作只能转染一个细胞电穿孔高水平(50%或更高)的毒性DEAE-葡聚糖转染法仅限于瞬时转染脂质体转染法试剂较昂贵
细胞转染实验原理仪器试剂和操作步骤外源基因进入细胞主要有四种方法:电击法磷酸钙法和脂质体介导法和病毒介导法电击法是在细胞上短时间暂时性的穿孔让外源质粒进入磷酸钙法和脂质体法是利用不同的载体物质携带质粒通过直接穿膜或者膜融合的方法使得外源基因进入细胞病毒法是利用包装了外源基因的病毒感染细胞的方法使得其进入细胞但是由于电击法和磷酸钙法的实验条件控制较严难度较大病毒法的前期准备较复杂而且可能对于细
一.高通量药物筛选在新药研发中的应用高通量药物筛选的原理就是药物多是通过特异地作用于体内的靶点蛋白质(受体酶离子通道等)而重新调整病人的生理状态达到治疗目的该技术是指以分子水平和细胞水平的实验方法为基础以微板形式作为实验工具载体以自动化操作系统执行试验过程以灵敏快速的检测仪器采集实验结果数据以计算机对实验数据进行分析处理同一时间对数以千万样品检测并以相应的数据库支持整体系运转的技术体系高通量筛选在
细胞筛选一 嘌呤霉素确定最优筛选浓度当用于筛选特定细胞的嘌呤霉素合适浓度未知时需进行滴定或制定针对那种细胞的嘌呤霉素杀菌曲线一般而言嘌呤霉素浓度范围在2-10微克毫升时是足以杀灭大多数未转染的哺乳动物细胞系培养待转染(而不是转染后)的细胞(筛选的目的是杀灭未转染的细胞)取对数生长期的细胞(一般在铺满培养器皿底部的7080时)用新鲜无抗无血清的培养基制成×105 个ml 的细胞悬液向96孔培养板中
T细胞转染一、前言:原代 T 细胞的常用病毒有两种:1 逆转录病毒(mTRv 和 hRv)2 悬浮细胞专用的腺病毒(Ads)逆转录病毒感染细胞具有物种特异性,适用小鼠原代 T 细胞的为 mTRv,适用人原代 T 细胞的为 hTRv。逆转录病毒可以用来构建稳转系。专用腺病毒 Ads 不区分物种,对人、小鼠等物种的原代 T 细胞均具有很高的感染效率,另外,Ads 也非常适用感染其他悬浮细胞,如 Ju
细胞转染操作方法转染 ,是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入,转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。转染大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类途径。电穿孔法、显微注射和基因枪属于通过物理方法将基因导入细胞的范例;化学介导方法很多,如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法、和多种阳离子物质介导的技术;生物介导方法,有较为原始的原生质体转染,和现在比较多
细胞转染注意事项:1如为贴壁生长细胞,一般要求在转染前一日,必须应用胰酶处理成单细胞悬液,重新接种于培养皿或瓶,转染当日的细胞密度以70-90%(贴壁细胞)或2×106-4×106细胞/mL(悬浮细胞)为宜,最好在转染前4h换一次新鲜培养液。2用于转染的质粒DNA必须无蛋白质,无RNA和其他化学物质的污染,OD260/280比值应在18以上。3培养基中的血清在开始准备DNA和转染试剂稀释液时要使
◆外核膜◆内核膜◆核纤层◆核周间隙◆核孔复合体(二)核被膜在细胞周期中的崩解与装配 Nuclear face-basket innerplex对应的NPC结构被动运输(passive transport)小于10nm的分子自由出入主动运输(active transport)具有入核信号的蛋白的入核RNA分子核糖核蛋白颗粒出核DNA分子一级结构具有多样性DNA A helixright ha
细胞转染一、实验目的:学习和掌握外源基因导入真核细胞的主要方法酸钙沉淀法介导的转染。了解外源基因进入的一般性方法,观测外源蛋白的表达(绿色荧光蛋白),为染色准备实验材料。二、实验方法原理:酸钙沉淀法是基于磷酸钙-DNA复合物的一种将DNA导入真核细胞的转染方法,磷酸钙被认为有利于促进外源DNA与靶细胞表面的结合。磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过胞饮作用进入靶细胞,被转染的DNA可以整合到靶
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