(2) 所用的试剂作用⑥ RNase A⑧ 酚-氯仿②引物的长度3端(特别是最末及倒数三个碱基)必须与模板严格配对5端可以不配对GACGG53CAGGACTTAGTCACT5Tm值是指溶液中有半数的DNA分子解链为单链时的温度两条引物的Tm值尽可能相等或相近最好相差不超过2 oC94℃ 4 min (预变性) 94℃ 30 sec 60℃ 30 sec 72℃ 2 min
PCR 原理denature dsDNA ssDNA 92-96℃?annealing 37-72℃ 50-58℃?extension 72℃ 这三个热反应过程的重复称为一个循环 同时检测多个突变或病原减少引物二聚体提高PCR特异性定量PCR膜结合PCR锚定PCR (anchored PCR) 其它体外核酸扩增技术 链替代扩增(SDA)什么是PCRPCR的程序是什么什么是锚
第一章 基因工程第二节 基因工程的原理和技术基因工程的基本原理:让人们感兴趣的基因(目的基因)在宿主细胞中稳定和高效表达基因工程的基本操作步骤:1获得目的基因2形成重组DNA分子3将重组DNA分子导入受体细胞4筛选含有目的基因的受体细胞5目的基因的表达一目的基因的获取1目的基因主要是指______________________请举出三个以上的例子2获取目的基因的方法(1)从基因文库中
非编码区终止子能够编码蛋白质的序列叫做外显子 原核细胞不具有剪切拼接mRNA的能力所以真核细胞的基因不能在原核细胞的受体细胞中正确表达都由能够编码蛋白质的______ 和具有调控作用的______ 区组成的苏云金芽孢杆菌直接分离基因人工合成基因蛋白质的氨基酸序列PCR——聚合酶链式反应 是一项生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术通过此技术可获取大量的目的基因模板DNADNA引
非复制型载体 瞬时转染的载体(启动子功能分析的载体) 选择标记DNA带有病毒复制子的质粒 SV40BPVEBV病毒转导载体 腺病毒杆状病毒牛痘病毒Lentivirus等两个物理上不相连的基因通过共转染共同整合到基因组中的现象这是由于发生了整合之前的DNA融合只要能同时转入一个选择标记基因共转化现象就可以使任何外源DNA序列稳定转入哺乳动物细胞根据标记基因筛选方法选择标记可以分为:内
第五章大肠杆菌克隆策略大肠杆菌克隆以大肠杆菌为克隆宿主,是基因工程操作最常见的克隆方式转化或转染入大肠杆菌克隆策略举例:1)克隆基因组DNA2)克隆cDNA文库3)差异克隆4)定点诱变第一节 克隆基因组DNA基因组文库文库法克隆将所研究生物材料的所有DNA不加选择地分离成若干易于处理的片段,并全部克隆的研究方式。这样一个克隆的集合代表了整个起始材料的DNA,称为文库。依据文库的DNA来源与组成
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级基因工程原理---基本操作步骤1993年我国科学家将苏云金芽孢杆菌的杀虫蛋白基因导入棉花细胞培育出了抗棉铃虫效果明显的棉花新品系普通棉抗虫棉基因工程培育抗虫棉的简要过程苏云金芽孢杆菌(有抗虫特性)抗虫基因与载体DNA拼接导入棉花细胞(含抗虫基因)普通棉花 (无抗虫特性)棉花植株(有抗虫特性)切取植物组织培养技术思考:棉花植株有
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级第一章 基因工程1.2 . 基因工程的原理和技术二基因操作的基本步骤获取目的基因形成重组DNA分子将重组DNA分子导入受体细胞4.筛选含有目的基因的受体细胞5.目的基因的表达1目的基因序列已知: 通过化学方法人工合成2目的基因序列未知: 从基因文库中获取
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级细胞质遗传 细胞质遗传 第二级第三级基因工程的成果与发展前景生物技术Biotechnology食品与营养工程学院 李西腾 第一章 基因工程二 基因工程概述三 基因工程的工具酶和载体四 基因工程的基本技术五 基因工程的应用一
单击此处编辑母版标题样式单击此处编辑母版文本样式第二级第三级第四级第五级生物技术制药第二章基因工程基础(1)基因工程基础DNA的体外重组外源基因表达系统生物技术制药一些基因工程相关问题2.1 DNA的体外重组DNA体外重组的主要步骤目的基因的分离基因工程载体含目的基因的DNA片段与载体的连接重组体转入宿主(受体)细胞重组体克隆的筛选和鉴定外源基因表达产物的活性测定外源基因表达产物的分离纯化生物技术
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