实验基本原理RNA可以使用非变性或变性凝胶电泳进行检测在非变性电泳中可以分离混合物中不同分子量的RNA分子凡是无法确定分子量只有在变性情况下RNA分子完全伸展其泳动率才与分子量成正比判断RNA提取物的完整性是进行电泳的主要目的之一完整的未降解的RNA制品的电泳图谱应可清晰看到18s rRNA28s rRNA5s rRNA的三条带且28s rRNA的亮度应为18s rRNA的两倍实验试剂10.
实验原理 DNA电泳是基因工程中最基本的技术DNA制备及浓度测定目的DNA片段的分离重组子的酶切鉴定等均需要电泳完成根据分离的DNA大小及类型的不同DNA电泳主要分两类: (1)聚丙烯酰胺凝胶电泳??适合分离1kb以下的片段最高分辨率可达1bp也用于分离寡核苷酸在引物的纯化中也常用此中凝胶进行纯化也称PAGE纯化 (2)琼脂糖凝胶电泳??可分离的DNA片段大小因胶浓度的不同而异胶浓度为的凝胶可以分
DNA酶切及凝胶电泳第一节 概 述 一. DNA的限制性内切酶酶切分析 限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上并切割双链DNA它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA而Ⅲ类酶在识别位点上切割DNA分子然后从底物上解离Ⅱ类由两种酶组成:
1掌握琼脂糖凝胶电泳分离核酸的原理和方法2学习核酸染色的方法 DNA分子在pH高于其等电点的溶液中带负电荷在电场中向正极移动(电荷效应) DNA分子泳动速率的大小除与DNA分子的带电量有关外还与DNA分子的大小和空间构象有关(琼脂糖凝胶的分子筛效应)电泳时用溴酚蓝做前沿指示剂指示DNA样品在凝胶中的确切位置溴乙啶是一种荧光染料可插入DNA双螺旋结构的两个碱基对之间与DNA分子形成络合物在紫外光的激
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实验原理过硫酸胺(AP)浓缩胶的作用是有堆积作用凝胶浓度较小孔径较大把较稀的样品加在浓缩胶上经过大孔径凝胶的迁移作用而被浓缩至一个狭窄的区带 样品进入分离胶后慢离子甘氨酸全部解离为负离子泳动速率加快很快超过蛋白质高电压梯度随即消失此时蛋白质在均一的外加电场下泳动但由于蛋白质分子所带的有效电荷不同使得各种蛋白质的泳动速率不同而形成一条条区带分离范围3694考马斯亮蓝(7)样品溶解液:
凝胶电泳的实验原理6 q E u6 R B U6 聚丙烯酰胺凝胶电泳普遍用于分离蛋白质及较小分子的核酸琼脂糖凝胶孔径较大适用于分离同工酶及其亚型大分子核酸等应用较广琼脂糖和聚丙烯酰胺可以制成各种形状大小和孔隙度琼脂糖凝胶分离DNA片度大小范围较广不同浓度琼脂糖凝胶可分离长度从200bp至近50kb的DNA片段琼脂糖通常用水平装置在强度和方向恒定的电场下电泳聚丙烯酰胺分离小片段DNA(5
双向凝胶电泳(2-DE)双向凝胶电泳的原理是第一向基于蛋白质的等电点不同用等电聚焦分离第二向则按分子量的不同用SDS-PAGE分离把复杂蛋白混合物中的蛋白质在二维平面上分开近年来经过多方面改进已成为研究蛋白质组的最有使用价值的核心方法分离蛋白质组所有蛋白的两个关键参数是其分辨率和可重复性在目前情况下双向凝胶电泳的一块胶板(16cm×20cm)可分出34千个甚至1万个可检测的蛋白斑点这与10万个基因
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