实验二、葡聚糖凝胶柱层析1、目的与要求: 11、学习凝胶(Gel)层析法的基本原理; 12、掌握葡聚糖凝胶(Sephadex)柱层 析的操作技术。2、概述及原理: 凝胶 是一类不溶于水,在水中却有较大膨胀度和较好的分子筛功能,具有立体网状结构的物质(如葡聚糖、琼脂糖、聚丙烯酰胺等)。 21、能用于层析的凝胶主 要有下面几种: 目前主要有葡聚糖凝胶(商品名为Sephadex),天然琼脂
凝胶基质一凝胶的处理 Sephadex G-100干粉经蒸馏水室温充分溶胀48h或沸水浴中煮沸2h冷却至室温后抽真空脱去颗粒空隙中的空气
目 的5上样与收集 打开出口排水当胶床与上方水层的弯月面相切时加入混合样液上样完毕开始收集一号管每管收集洗脱液2mL 当样液进入胶床其弯月面与胶平面相切时暂停排液用滴管将洗脱剂沿柱内壁旋转着加入1cm高水位然后排液至其弯月面与胶平面相切再缓缓注入35cm高的洗脱剂6洗脱 不断向柱内加洗脱剂保持胶床上水位35cm出口流速控制在每6秒1滴直至收集到6号管达2m
蛋白质含量的测定(考马斯亮蓝法和Fulin酚法) 8学时 正交法寻找蔗糖酶的最适反应条件 8学时_:::赵永芳. 生物化学技术原理及应用.北京. 科学出版社.2002沈同 王镜岩.生物化学.高等教育出版社.2002高效液相色谱仪凝胶层析原理实验步骤(一)卵球蛋白的沉淀7—
【实验用品】 1材料葡聚糖凝胶Sephadex G-100蓝色葡聚糖2000溶菌酶 2试剂(1)蓝色葡聚糖-2000(2mgmL)和溶菌酶(6mgmL)组成的混合液(2)乙酸缓冲液 3器具色谱柱铁架台试管紫外分光光度计或紫外检测仪电炉容量瓶烧杯三角瓶滴管移液管玻棒
葡聚糖凝胶是多聚葡聚糖和环氧氯丙烷相互交联形成的三维网状结构见图通过控制二者的配比及交联时的反应条件获得具有不同网眼(孔隙)的凝胶交联度越大网眼越小交联度越小网眼越大网眼(孔隙)的大小决定了被分离物质能够自由出入凝胶内部的分子量范围一般从几百到数十万不等葡聚糖凝胶层析法分离混合物
实验二凝胶层析法测定蛋白质分子量一、实验目的1 了解凝胶层析的原理及其应用。2 通过测定蛋白质分子量的训练,初步掌握凝胶层析技术。二、实验原理凝胶层析又称排阻层析,凝胶过滤,渗透层析或分子筛层析等。它广泛地应用于分离、提纯、浓缩生物大分子及脱盐、去热源等,而测定蛋白质的分子量也是它的重要应用之一。凝胶是一种具有立体网状结构且呈多孔的不溶性珠状颗粒物质。用它来分离物质,主要是根据多孔凝胶对不同半径
蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳实验原理聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺单体(Acr)和少量的交联剂NNˊ-甲叉双丙烯酰胺(Bis)在催化剂(过硫酸胺或核黄素)和加速剂(N?NNˊNˊ-四甲基乙二胺)的作用下聚合交联成的三维网状结构的凝胶以此凝胶为支持物的电泳称聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)具有机械性能好化学性能稳定灵敏度好分辨率高的优点PAGE应用十分广泛可用于蛋白质酶核酸等生物分子的分离定性定量和少量制备还
第 29 卷第2 期
电子科技大学生命科学与技术学院本科教学实验指导书(实验)课程名称:生物大分子纯化技术 电子科技大学教务处制表目 录实验一重组质粒pGEFHheC转化大肠杆菌 3附:大肠杆菌感受态菌制备(CaCl2法) 4 质粒提取
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