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蛋白质的分离与纯化蛋白质分离纯化的基本流程 选择材料和预处理 细胞的破碎及细胞器的分离 蛋白质的抽提 蛋白质的纯化 浓缩干燥和保存一材料的选择和预处理 微生物植物和动物都可做为制备蛋白质的原材料所选用的材料主要依据实验目的来确定 从工业生产角度考虑注意选含量高来源丰富及成本低的原料 对动物组织必须选择有效成份含量丰富的脏器组织为原材料先除去结缔组织和脂肪组织 对预处理好的材料若不立即
蛋白质分离纯化及蛋白质测定方法及评价一、 蛋白质分离纯化方法 研究蛋白质或酶的物理及化学性质,首先需进行纯化 若要研究蛋白质或酶的主体结构及酶的活性中心,催化反应机理等,则还需清除最后残留在分子中的微量其它蛋白和大分子化合物分离蛋白质及酶类要顾及最大的生产量要顾及最大的催化活性要使蛋白及酶纯度尽可能达到最高1 蛋白质分离纯化的技术路线设计及条件蛋白质的分离纯化不可能有一个固定的程序适用于各种蛋白质
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蛋白质的分离纯化方法沉淀法:原理:是使蛋白质胶体颗粒的表面水化膜或表面电荷破坏从而使蛋白质沉淀盐析法有机溶剂沉淀法等点电沉淀法选择性变性沉淀法聚合物沉淀法在生物大分子制备中最常用的几种沉淀方法是:中性盐沉淀(盐析法):最大的特点是环境温和不易造成蛋白质变性因此适用于各种蛋白质和酶的分离纯化缺点是分辨率底且后续处理时需要除盐 有机溶剂沉淀:分辨率高于盐析法但容易引起目的蛋白失活所以多用于生物小分子
表达蛋白的分离与纯化大肠杆菌表达蛋白以可溶和不溶两种形式存在,需要不同的纯化策略。现在,许多蛋白质正在被发现而事先并不知道它们的功能,这些自然需要将蛋白质分离出来后,进行进一步的研究来获得。分析蛋白质的方法学现已极大的简化和改进。现已有多种方法可以利用,蛋白质纯化策略也已实际可行。目前,待研究蛋白或酶的基因的获得已是相当普遍的事。可诱导表达系统特别是Studier等发展的以噬菌体T7 RNA聚
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实验一 氨基酸的分离鉴定——纸层析法实验目的学习氨基酸纸层析的基本原理掌握氨基酸纸层析的操作技术实验原理纸层析法是用滤纸作为惰性支持物的分配层析法层析溶剂由有机溶剂和水组成滤纸和水的亲和力强与有机溶剂的亲和和弱因此在展层时水是固定相有机溶剂是流动相将样品点在滤纸上(原点)进行展层样品中的各种AA在两相溶剂中不断进行分配由于它们的分配系数不同不同AA随流动相移动速率就不同于是将这些AA分离开来
分离纯化蛋白质的方法及原理(一)利用分子大小1透析:原理:利用蛋白质分子不能透过半透膜的性质使蛋白质和其他小分子物质如无机盐单糖水等分开 方法:将待提纯蛋白质放在透析袋中放在蒸馏水中进行 涉及的问题: 如何加快透析过程加大浓度差及时更换透析液利用磁力搅拌器 常用的半透膜:玻璃纸火棉和其他材料合成2超过滤:原理:利用压力和离心力强行使其他小分子和水通过半透膜而蛋白质留在膜上3凝胶
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