第55 卷 第 11 期
第55 卷 第 11 期
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HEREDITAS (Bei
第卷第期
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植物基因组植物基因组DNADNA
levelThird level levelThird level levelThird level levelThird level levelThird level重组DNA技术与基因工程5 2 3 4 1 6 重组DNA技术与基因工程的基本概念重组DNA技术所需的基本条件重组DNA技术的操作过程目的基因的克隆与基因文库的构建外源基因在大肠杆菌中的表达外源基因在酵母中的表
第一节 质粒和质粒提取Chapter 1 Plasmid and Plasmid extract理想克隆载体的特性BamHI3个基本步骤:培养细菌使质粒扩增收集和裂解细胞分离和纯化质粒DNA用溶菌酶破坏菌体细胞壁十二烷基磺酸钠(SDS)裂解细胞膜经溶菌酶和SDS处理后细菌染色体DNA会缠绕在细胞碎片上而质粒比细菌染色体DNA小得多所以3000-5000g离心后质粒留在上清液中1 LB液体
DNA重组技术(基因工程)的应用核酸外切酶:从核酸的一端开始一个 一个的水解核苷酸或其大片段(Klenow)多核苷酸激酶磷酸酶一.质粒二.噬菌体已将COS位点接入PBR322质粒的抗氨苄青霉素基因上形成了装配型质粒这种质粒可以容纳大至35—40kb的外源DNA(而λ—噬菌体DNA只能容纳16kb) 所以适用于克隆真核细胞大片段基因装配型质粒也带有复制起点与抗四环素基因DNA重组的步骤:
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