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  酶联免疫吸附实验免疫酶技术是本世纪60年代末期发展起来的一种免疫检测方法是目前最广泛应用的标记免疫技术1966年Nakene和Pierce共同发表了《酶标抗体：制备和抗原定位中的应用》首先提出了免疫酶技术的基本原理1971年Engvall和Perlmann发表《酶联免疫吸附试验测定IgG含量》一文使免疫酶技术成为一种实用的检测液体标本中微量物质的方法目前免疫酶技术已广泛用于免疫学微生物学寄生虫学等

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  酶免疫测定是将抗原抗体反应的高度特异性和酶的高效催化作用相结合发展建立一种非放射性标记免疫分析方法由于ELISA具有灵敏度高特异性强酶免疫试剂的性质比较稳定操作方法简便快速无放射性污染以及应用范围广等很多优点在医学基础理论研究临床病毒学和生物化学检验等工作中应用十分广泛该法需将纯化的抗原包被在固相载体与一定稀释度的待侧血清反应然后与酶标记的第二抗体(抗人IgGIgAIgM或抗人的混合物)反应

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  (1)利用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接(2)通过酶与底物产生颜色反应用于定量测定测定的对象可以是抗体也可以是抗原(2)间接法测定抗体A.????? 将抗原吸附于固相载体表面B.????? 加抗体 形成抗原-抗体复合物 C.????? 加酶标抗体D. 加底物测定底物的降解量抗体量 取酶标板加入100μL孔的抗原稀释液3各孔加入酶标单抗100μL孔阴性棕黄色蓝色黄色

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  参考管抗原7?酶标二抗：稀释HRP标记羊抗猪IgG每孔100μL37℃作用30min8洗涤9显色：加新鲜配制的TMB底物液每孔100μL室温避光作用15min10加终止液：加50μL?2molL硫酸11读数：用酶标仪检测OD450值

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  实验九 酶联免疫吸附试验 (Enzyme ?Linked?Immunosorbant?Assay，ELISA)1、掌握抗原和抗体的制备方法 2、掌握酶联免疫分析抗体效价的方法实验目的实验原理用于检测包被于固相板孔中的待测抗原(或抗体)。将已知的抗原或抗体吸附在固相载体 ( 聚苯乙烯微量反应板 ) 表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。最后通过酶作用于底

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  酶联免疫吸附实验(ELISA)要点　免疫吸附剂　　已包被抗原或抗体的固相载体在低温(28℃)干燥的条件下一般可保存6个月有些不完整的试盒仅供应包被用抗原或抗体检测人员需自行 包被以下简述固相载体和包被过程　固相载体　　固相载体在ELISA测定过程中作为吸附剂和容器不参与化学反应可作ELISA中载体的材料很多最常用的是聚苯乙烯聚苯乙烯具有较 强的吸附蛋白质的性能抗体或蛋白质抗原吸附其上后仍保留

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  酶联免疫吸附测定法 免疫学实验基本原理它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂）②酶标记的抗原或抗体（标记物）③酶作用的底物（显色剂）双抗体夹心法，属于非竞争结合测定。它是检测抗原最常用ELISA，适用于检测分子中具有至少两个抗原决定簇的多价抗原。?

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  酶联免疫吸附实验(ELISA)基本原理在临床检验中一般采用商品试剂盒进行测定前文(2.2)已述ELISA中有三个必要的试剂：免疫吸附剂结合物和酶的底物　　完整的ELISA试剂盒包含以下各组分：(1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂)(2)酶标记的抗原或抗体(结合物)(3)酶的底物(4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中)参考标准品和控制血清(定量测定中)(5)结合物及标本的稀释液(6)

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